人或狗DNA与猪或狗DNA怎么分辨 ，关键不是观察DNA条带的粗细或亮度 ，而是检测样本中是否存在人、狗、猪各自特异性的遗传象征。现实操作通常依照“取样与提取DNA—物种特异性PCR或qPCR检测—对照验证—必要时测序确认”的挨次进行。
若是两组样本都可能含有狗DNA ，单独检测到“狗阳性”并不能注明两者一样 ，也不能分辨另一部门到底来自人还是猪。此时必须把人、狗、猪别离作为三个检测指标 ，别离查看每个象征的了局。
先明确要分辨的是单一起源还是混合起源
“人或狗DNA”和“猪或狗DNA”可能有两种寓意：一种是每份样本只来自一个物种 ，但尚不确定是人、狗还是猪；另一种是样本自身可能混合了两种或多种起源。两种情况的检测步骤相近 ，但了径喙释分歧。
- 单一起源样本：沉点是判断哪个物种象征阳性 ，并确认其他物种象征为阴性。
- 混合起源样本：必要判断哪些物种成分同时存在 ，不能由于某一个物种阳性就排除其他成分。
- 两组都可能含狗DNA：狗象征只能注明样本中有狗成分 ，真正的区别要看人象征或猪象征。
若样本被以为是单一起源：用三组物种特异性象征筛查
最直接的法子是筹备人、狗、猪三组特异性引物或探针 ，别离进行PCR或实时荧光定量PCR。引物应针对在指标物种中不变、在其他物种中不容易扩增的序列。检测时同时参与阳性对照、阴性对照和扩增内参 ，预防把尝试失败误判为“没有该物种DNA”。
- 提取DNA：从血液、毛根、组织、口腔拭子或其他样本中提取DNA ，并纪录样正本源。毛发只有带毛根时通常更容易获得核DNA ，单纯毛干可能重要依赖线粒体DNA。
- 检测DNA质量：先确认提取物没有显著降解或抑造物。浓度太低、样本凋落或提取残留物较多 ，都可能造成假阴性。
- 别离扩增三类象征：人象征、狗象征和猪象征应有清澈的阳性对照反映 ，阴性对照不能出现指标信号。
- 读取扩增了局：凭据各通路是否阳性 ，初步判断样本含有哪些物种DNA。
- 必要时复核：对扩增片段进行测序 ，或换用另一组独立象征沉复检测。
例如 ，某样本出现人象征阳性、狗象征阴性、猪象征阴性 ，通�？杀硎鑫凹觳獾饺嗽碊NA ，未检测到指标领域内的狗源和猪源DNA”。若是只有狗象征阳性 ，则更切合狗源DNA；若是只有猪象征阳性 ，则更切合猪源DNA。
若两组样本都可能含狗DNA：沉点比力人象征和猪象征
当比力对象是“人或狗DNA”与“猪或狗DNA”时 ，不能只做狗DNA检测 ，由于狗可能是两组样本共有的成分。更合理的做法是对每组样本都使用统一套三物种检测面板 ，并将了局放在一路比力。
| 人象征 | 狗象征 | 猪象征 | 初步判断 |
|---|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | 阴性 | 以人源DNA为主 |
| 阴性 | 阳性 | 阴性 | 以狗源DNA为主 |
| 阴性 | 阴性 | 阳性 | 以猪源DNA为主 |
| 阳性 | 阳性 | 阴性 | 可能为人和狗混合 ，或存在交叉传染 |
| 阴性 | 阳性 | 阳性 | 可能为狗和猪混合 ，或存在交叉传染 |
| 三项均阴性 | — | — | 先查抄DNA质量、抑造物和扩增是否有效 |
例如 ，第一组样本为“人阳性、狗阳性、猪阴性” ，第二组为“人阴性、狗阳性、猪阳性” ，这比只比力DNA条带更能支持“第一组含人和狗成分 ，第二组含猪和狗成分”的判断。但这种了局依然不能注明每种DNA的具体比例 ，也不能直接判断某一条DNA来自哪一个个别。
若疑惑是混合样本：先做物种筛查 ，再决定是否深刻分型
混合样本中 ，指标DNA的比例可能差距很大。例如 ，少量人DNA混在大量狗DNA中 ，通常PCR可能只显示狗阳性；猪DNA含量很低或已经降解时 ，也可能出现猪象征弱阳性甚至临时阴性。因而 ，混合样本不宜只依赖一次扩增。
- 优先使用活络度较高的物种特异性qPCR或多沉PCR ，别离检测人、狗、猪象征。
- 对可疑的弱阳性了局沉复提取、沉复扩增 ，并观察分歧稀释度下信号是否不变。
- 使用分歧遗传区域的第二组象征复核 ，预防单个位点的非特异性扩增影响结论。
- 若是还要判断混合比例或个别起源 ，必要进一步使用相应物种的STR、SNP等分型步骤 ，而不是只看物种阳性与否。
必要把稳的是 ，线粒体DNA在毛发、骨骼等低量或降解样本中往往更容易检测到 ，但它重要反映母系遗传 ，不能单独用于确认具体个别。若要形成更稳妥的物种判断 ，通常应将线粒体象征与核DNA象征结合。
若DNA量少或已经降解：先排除“检测不到”造成的误判
样本量少、保留功夫长、受潮、受热或含有抑造PCR的物质时 ，检测不到某一物种象征 ，并不蹬宗样本绝对不含该物种DNA。此时应查看扩增内参是否正常。内参也没有信号 ，通常注明提取物质量或扩增系统存在问题；内参正常而某一物种象征反复阴性 ，才更支持该指标在检测领域内未被发现。
对于降解样本 ，能够选择扩增片段较短的象征 ，增长沉复检测次数 ，并尽量预防反复冻融。若样正本自多个接触者或多个动物 ，取样时还应别离封装、别离提取 ，预防在操作过程中把分歧起源的DNA混到一路。
为什么不能只靠电泳条带或肉眼判断
琼脂糖凝胶电泳重要用于观察扩增产品是否存在、大幼是否大体切合预期。分歧物种的DNA原始分子很长 ，即便起源分歧 ，直接电泳也通常不能凭条带表观判断是人、狗还是猪。即便PCR产品大幼一样 ，也不代表序列一样；反过来 ，条带深浅也不能直接代表某种DNA的真实含量。
因而 ，较靠得住的判断链条应是：统一批样本分别检测人、狗、猪特异性象征；确认对照有效；对混合或异常了局沉复验证；必要时通过测序确认扩增片段的序列起源。若是只是想知路两组样本分别更靠近“人或狗”还是“猪或狗” ，最关键的比力项就是人象征和猪象征 ，狗象征则用来确认是否存在共同的狗源成分。
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